Sim :-)
Normalmente, quando os contatos entram numa automação e chegam ao fim do fluxo, podem voltar a entrar no fluxo sempre que quiserem.
Mas se na sua automação for importante que os contatos só entrem uma vez (ex. se oferecer um voucher de desconto exclusivo a quem se inscreve num formulário e a pessoa não pode recebê-lo novamente), é simples:
1) Vá ao menu Comunicar. Em Automações, clique em Ver todas.
2) Clique no botão de opcões da automação que criou e escolha Opções.
3) Na janela que aparecer, desmarque Aceitar contatos mais do que uma vez e grave a modificação.
É só isso! Daí em diante, os contatos que entrem na automação não vão poder entrar outra vez.
Posso fazer com que o contato entre só uma vez a partir de um certo trigger da automação?
Sim! Basta editar a automação e editar o trigger que pretende. Aí, desmarque a opção Aceitar contatos mais do que uma vez e grave. Feito isso, os contatos não poderão entrar mais do que uma vez nesse trigger.